显微镜像的质量主要取决于像的反差和像的亮度，而一定要防止在显微镜像中把激发光和发射的荧光混在一起。
荧光显微镜检术中，显微镜像的质量主要取决于像的反差和像的亮度，像反差是由样品中特异染色的结构发射的荧光与本底上观察到的光之比决定的，本底光包括透过阻挡激发光的D二滤波器的杂散激发光、组织成分的自生荧光和显微镜光学部分的光，荧光显微镜检术国尽全力要的是一方面获得更好的像反差，同时又维持像有足够亮度，显然，获得更好的反差像的办法可能导致荧光像的变暗，例如，由于使用又维持像有足够 亮度，为了便于直观观察和显微照相时用适当短的曝光时间，需要足够亮的像，所以常要用宽波激发，于是仅产生特异FRP的荧光，而且还有其它组织成分的荧光，即构成非特异本底荧光，大多数应用中，一定要兼顾特异强度与非特异本底荧光在合理的低水平之间的要求。
