光学显微镜成像受到多种因素的影响,这些因素可以归纳为以下几个方面:
一、被检物体准备
切片厚度:切片厚度是否适中非常关键,过厚的切片会导致光线穿透困难,影响成像清晰度。
盖玻片质量:盖玻片是否符合国家标准,其平整度、清洁度等都会影响成像质量。
二、显微镜硬件因素
物镜档次:物镜按档次可分为多个级别,常用的为平场消色差物镜。物镜档次低会导致成像质量下降,因此建议选择较G档次的物镜。
聚光镜孔径光栏:聚光镜孔径光栏应与物镜的数值孔径相匹配,以获得Z佳的图像分辨率。
调焦系统:调焦系统的精度对成像质量有重要影响。熟练的操作者能快速找到图像并聚焦,提高工作效率。
载物台:载物台的精度和稳定性影响成像质量。双层机械移动平台通常具有较好的精度和稳定性。
非球面集光镜:能提供非常均匀的照明光线,使得观察到的显微图像衬度J佳。
三、光学相差
色差:多色光为光源时,由于各种光的波长不同,在通过透镜时的折射率也不同,导致物方一个点在像方形成色斑,影响成像清晰度。
球差:轴上点的单色相差,由于透镜的球形表面造成,使得一个点成像后不是亮点,而是一个中心亮、边缘模糊的亮斑。
慧差:轴外点的单色相差,导致光点的像形成逗点状,影响成像质量。
像散:轴外点单色相差,使物点在成像后变成两个分别且相互垂直的短线,形成椭圆形斑点。
场曲:透镜存在场曲时,整个光束的交点不与理想像点重合,导致整个像平面是一个曲面,影响观察。
四、其他因素
数值孔径(NA):描述了透镜收光锥角的大小,是判断物镜性能的关键指标,影响分辨率、焦点深度、镜像亮度等。
分辨率:能被显微镜清晰区分的两个物点间的Z小距离,是显微镜能否看清楚小物体或细节的关键。
光通量:物镜决定进入系统的光通量,影响视野亮度和成像质量。
使用环境:显微镜应放置在干燥清洁的房间,避免光学部件发霉、金属部分生锈以及粘满灰尘。同时,避免与腐蚀性化学品接触,防止损坏。
综上所述,光学显微镜成像受到被检物体准备、显微镜硬件因素、光学相差以及其他多种因素的影响。在实际使用中,需要综合考虑这些因素,以获得高质量的成像效果。